"ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ЦЕНТР"
     НАУЧНО-ПРОИЗВОДСТВЕННАЯ ФИРМА
     633159,Новосибирская область, Новосибирский район,п.Кольцово,
     Тел. (3832)-36-71-32, Fax: (3832)-36-63-06

У Т В Е Р Ж Д А Ю
     Директор НПФ "ИЦ"

______ А.И.Леляк
     "__" _______199__г.

О Т Ч Е Т
     О НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКОЙ РАБОТЕ
     ПО СОЗДАНИЮ ВЕТЕРИНАРНЫХ И МЕДИЦИНСКИХ ПРЕПАРАТОВ НА ОСНОВЕ
     Bacillus subtilis и Bacillus licheniformis 

     Новосибирск 2003 г.

С О Д Е Р Ж А Н И Е

     1. ВВЕДЕНИЕ
     2. Л И Т Е Р А Т У Р Н А Я С П Р А В К А
     2.1. Биологически активные вещества продуцируемые Bac. Subtilis и Bac. Licheniformis
     2.2. Перспективы получения лекарственных препаратов на основе биологически активных веществ,
     продуцируемых Bacillus Licheniformis и Bacillus Subtilis 
     2.2.1.Лечебно-профилактические ветеринарные и медицинские препараты 
     2.2.2. Мазевые препараты для местного лечения гнойных ран.
     1.2.3. Перспективы получения мазевых форм на основе биологически активных веществ, продуцируемых Bacillus Licheniformis и Bacillus Subtilis
     1.3. Анализ патентной информации
     1.4. Список литературы

     ПРИЛОЖЕНИЕ 1.

     Таблица 1 Перечень выпускаемых препаратов a -интерферона
     Таблици 2 Динамика цен на препараты интерферона (по каталогам фирм).
     Таблица 3. Спектр вирусных инфекций человека, при которых получен положительный эффект от использования в терапии интерферона или его аналогов.
     Таблица 4. Список онкологических заболеваний человека, при которых получен положительный эффект от применения препаратов интерферона или его аналогов.

1. В В Е Д Е Н И Е

    Создание лекарственных препаратов на основе биологически активных веществ, продуцируемых бактериями, является одним из перспективных направлений современной биотехнологии. Комплекс ферментов, антибиотиков, ростовых факторов и прочих продуктов жизнедеятельности бактерий в настоящее время изучается и находит применение в различных областях медицины и ветеринарии. Препараты на основе Bac. subtilis и Bac. licheniformis ("Бактисубтил", "Биоспорин", "Споробактерин") используются для лечения дисбактериозов, диареи, энтеритов, колитов, метеоризма, воспалительных процессов и аллергических заболеваний, тонзиллитов, пищевой аллергии, диатеза, экземы как у животных, так и у человека. В литературе приводятся многочисленные сведения о положительных результатах применения этих препаратов при лечении молодняка крупного рогатого скота, свиней, овец, домашней птицы. Терапия остается эффективной и для больных, имеющих непереносимость к антибиотикам и сульфаниламидам. Препараты на основе штаммов B. subtilis, обладающие антагонистической активностью в отношении многих патогенных и условно-патогенных микроорганизмов, имеют высокую эффективность при лечении заболеваний бактериальной этиологии, что дает возможность использовать их для очищения кожи и для лечения гнойных ран.
     Целью настоящей работы явилось создание различных форм бактериальных лекарственных препаратов для ветеринарии и медицины. на основе интерферон-продуцирующих штаммов Bac. subtilis и Bac. licheniformis. Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:
     · получение препаративных форм и отработка рецептур; 
     · изучение физико-химических свойств 
     · изучение спектра биологических активностей полученных композиций в экспериментальных системах in vitro и in vivo. 
     · разработка технической документации для представления в соответствующие инстанции. 
     · организация и лицензирование производства.

2. Л И Т Е Р А Т У Р Н А Я С П Р А В К А

2.1. Биологически активные вещества продуцируемые Bac. Subtilis и Bac. Licheniformis

     Спорообразующие аэробные бактерии продуцируют широкий спектр биологически активных веществ (БАВ). В настоящее время только антибиотиков бактериального происхождения описано около 200. Bac. licheniformis образует антибиотики бацитрацин, лихениформин, протицин. Количество изученных антибиотиков Bac. subtilis составляет несколько десятков (Айзенман Б.Е., 1973). 
     Известно также, что бактерии Bac. licheniformis и Bacillus subtilis (сенная палочка) - широко распространены во внешней среде и обладают целым рядом позитивных качеств (Смирнов В.В. и др. 1982г.): 
     · являются антагонистом патогенной и условно-патогенной флоры (стафилококков, стрептококков, сальмонелл, дрожжевых грибков, протея) благодаря продуцируемым антибиотикам и способности закислять среду обитания; 
     · продуцируют ферменты, удаляющие продукты гнилостного распада тканей; 
     · синтезируют ряд аминокислот, витаминов и биологических иммунноактивных факторов.
     Очевидно, что описанный выше набор полезных свойств давно привлекает внимание исследователей. как в России, так и за рубежом
     В медицинскую и ветеринарную практику введены препараты, выделенные из культуральной жидкости бактерий и живые бактериальные штаммы ( Смирнов В.В., и др. 1980; Топчий М.П. 1979). Широко используются как антибиотики, так и протеолитические ферменты из микроорганизмов рода Bacillus, которые расщепляют фибрин, гидролизуют элластин, воздействуют на систему крови (Maceda-Coronels, 1974; Ingle, 1976) .
     Бактериальные препараты показали свою эффективность в качестве профилактических средства при различных иммунодефицитных состояниях у молодняка и у взрослых животных, а также в качестве лечебного средства при заболевании органов пищеварения. (Rocchietta, 1969; Смирнов В.В., 1994г., Сб. Рек. 1996г.) Препараты на основе B. subtilis: Российские лекарственные формы ("Бактисубтил", "Биоспорин", "Споробактерин" и др.) используются для лечения дисбактериозов, диареи, энтеритов, колитов, метеоризма, гнойных ран, воспалительных процессов и аллергических заболеваний, тонзиллитов, пищевой аллергии, диатеза, экземы как у животных, так и у человека. В литературе приводятся многочисленные сведения о положительных результатах применения этих препаратов при лечении молодняка крупного рогатого скота, свиней, овец, домашней птицы (Белявская В.А., 1996; Грачева Н.М., 1996) . В экспериментальных условиях опробован метод лечения животных путем введения живых бактерий внутрикожно, внутрибрюшинно, внутривенно. Авторы сообщают, что не наблюдали каких-либо признаков интоксикации, воспаления и иных негативных явлений. Было показано, что на живые бактерии в организме экспериментальных животных практически не нарабатываются антитела, тогда как после иммунизации убитыми клетками титры антител к антигенам бактериальных стенок резко возрастают (Никитенко В.И., 1991г.). Терапия остается эффективной и для больных, имеющих непереносимость к антибиотикам и сульфаниламидам. Препараты на основе штаммов B. subtilis, обладающие антагонистической активностью в отношении многих патогенных и условно-патогенных микроорганизмов, имеют высокую эффективность при лечении заболеваний бактериальной этиологии. 
     Описанные выше сферы применения БАВ бактериального происхождения можно значительно расширить, добавив к ним целый спектр препаратов, полученных генно-инженерным путем. Ведутся работы по получению штаммов, несущих гены интерлейкинов, инсулина (Carrier M.J. 1992) Наиболее успешными оказались работы, начатые в 1977г., по переносу в бактериальные клетки гена человеческого интерферона-альфа (ИФН-альфа). Этот белок (М.в. - 17-25 kD) относится к большому семейству пептидных факторов, которые продуцируются инфицированными вирусами клетками и защищают другие клетки от широкого круга вирусов. Интерфероны - мультигенное семейство, включающее три основных типа: ИФН-альфа, ИФН-бета, ИФН-гамма, имеющие различный состав (165 - 187 аминокислоп) и сходные биологические свойства (Вalkwill F.R., 1989).
     Взаимодействуя с иммунокомпетентными клетками через спе-цифические рецепторы, интерфероны всех типов регулируют работу клеточных генов. (Revel M. et al., 1986). Результаты воздействия интерферонов проявляются как на клеточном уровне, так и на уровне организма. Интерфероны защищают клетки от вирусной инфекции, подавляя внутриклеточную репликацию ДНК- и РНК-содержащих вирусов (McMahon M. et al., 1983).
     Исследования in vitro показали, что интерфероны способны оказывать цитостатический эффект на клетки злокачественных опухолей многих типов. Возможным механизмом этого воздействия является подавление экспрессии некоторых протоонкогенов (Kimchi A., 1987). В работах, проведенных in vivo на экспериментальных животных-опу-холеносителях, также было показано, что интерферон подавляет рост опухолей и метастазов. Возможно, что на уровне организма противоопухолевый эффект интерферона реализуется преимущественно посредством активации Натуральных киллеров и цитотоксических Т-лимфоцитов(Gresser I., 1985).
     Рекомбинантный интерферон-альфа является одним из первых цитокинов, примененных в клинической практике. В настоящее время медицинские препараты на основе интерферона успешно используются для лечения таких грозных заболеваний как лейкемия (Goldstein D. et al., 1986), различные типы злокачественных опухолей (Gresser I., 1985). Применеие интерферона при вирусных заболеваниях и при иммунодефицитных состояниях дает положительные результаты, поскольку интерферон является одним из ключевых факторов активации механизмов неспецифической резистентности. Помимо этого, интерферон активизирует эффекторные функции иммунокомпетентных клеток, что приводит к нормализации иммунного статуса и повышению устойчивости организма к заболеваниям различной этиологии.(Taylor-Papadimitriou J., 1984).
     В результате длительной работы ученых разных стран мира, были получены штаммы-продуценты этого цитокина (Дебабов В.Г. и др. 1988г.). В приведенных в Приложении 1 таблицах 1-4 показан спектр препаратов, получаемых на основе интерферонов различных типов.
     Приведенные выше данные в полной мере могут быть отнесены и к препаратам, представляющим собой генно-инженерные интерферон-продуцирующие штаммы бактерий, в частности, Bac.subtilis. Так, например, разработанный российскими учеными штамм 2335/105 послужил основой для создания ряда препаратов. Показано, что уровень бактериального синтеза интерферона составляет 10*3 - 10*4 М.Е./мл и индуцированного в организме - 640 М.Е./мл, что является достаточным для защиты организма от вирусной инфекции. В эксперименте было показано, что штамм-продуцент во многом похож на интерферон по своему биологическому воздействию: активирует Натуральные киллеры, защищает от экспериментальной вирусной инфекции, оказывает адъювантный эффект при вакцинации (Белявская В.А., 1996г.).
     Таким образом, широкий спектр собственной биологической активности, наряду с полной безвредностью и способность продуцировать интерферон, делает возможным применение их в качестве основы лечебно-профилактических препаратов в медицине и ветеринарии. При этом, иммунорегулирующее и противовирусное действие интерферона может проявиться в полной мере при обычных схемах перорального применения. Механизм воздействия синтезируемых в кишечнике пристеночным пулом бактерий биологически активных веществ на иммунную систему не достаточно изучен, однако наличие такого воздействия через специальные анатомические структуры - пейеровы бляшки,- не вызывает сомнений (Rudat K., 1994) 

2.2. Перспективы получения лекарственных препаратов на основе биологически активных веществ, продуцируемых Bacillus Licheniformis и Bacillus Subtilis

2.2.1.Лечебно-профилактические ветеринарные и медицинские препараты

     Задача создания лечебно-профилактических препаратов на основе интерферон-продуцирующих штаммов Bacillus Subtilis в России решается усилиями различных институтов и организаций. Разработанный в НПФ "ИЦ" ветеринарный препарат "Ветом" оказывает на организм ДВА существенных воздействия: 
     · антибиотическое действие против патогенной микрофлоры при бактериальных инфекциях; 
     · иммунорегулирующее действие при иммунодефицитных состояниях и при вирусных заболеваниях. 
     Аналогами препарата "Ветом" можно считать три группы лекарственных средств: бактериальные препараты на основе B. subtillis, антибиотики, иммунорегулирующие противовирусные средства. 
     1.Отличие препарата "Ветом" от существующих бактериальных аналогов заключается в том, что бактериальный штам, на основе которого разработан препарат, обладает повышенной эффективностью вследствие способности к наработке ИНТЕРФЕРОНА (См. приложение № 1), так как несет ген человеческого лейкоцитарного интерферона. Как описано ранее, этот цитокин является одним из ключевых факторов неспецифической резистентности организма при вирусных заболеваниях. Помимо этого, интерферон активизирует эффекторные функции иммунокомпетентных клеток, что приводит к нормализации иммунного статуса и повышению устойчивости организма к заболеваниям различной этиологии.
     Для лечения желудочно-кишечных заболеваний животных традиционно используются химиотерапевтические антимикробные средства - антибиотики. Положительным моментом действия антибиотиков по сравнению с "Ветомом" является то, что наиболее эффективные из антибиотиков оказывают свое действие гораздо быстрее, чем "Ветом". Это следует учитывать при лечении животных, находящихся в критических состояниях. Отрицательные последствия от применения антибиотиков известны: возникновение дисбактериозов, снижение иммунологической реактивности вследствие иммуносупрессирующего действия антибиотиков, снижение эффективности из-за эффекта "привыкания" патогенной микрофлоры и т.д. Кроме того, эти препараты дороги и вводятся, как правило парэнтерально, что создает определенные организационные проблемы. 
     В отличии от антибиотиков "Ветом" оказывает свое действие мягко, не провоцируя иммуносупрессии, дисбактериозов и прочих негативных явлений. Более того, препарат можно применять после антибиотиков для коррекции этих осложнений антибиотикотерапии. Пероральное применение "Ветома" и его относительно низкая стоимость также позволяет снизить затраты лечебного процесса. (Цены на антибиотики ветеринарного назначения находятся на уровне 700 рублей/доза, что дает 45-100 тыс. рублей на курс лечения. Объемы продаж антибиотиков в России занимает около 200 млрд рублей.)
     В настоящее время профилактике, диагностике и коррекции иммунодефицитных состояний сельскохозяйственных животных уделяется явно недостаточное внимание. Применение "Ветома" позволит подойти к этим проблемам с принципиально иных позиций. Уникальные свойства бактериального штамма обеспечивают наработку в организме больного иммунорегулирующего вещества (ИНТЕРФЕРОН), обладающего антивирусным действием. 
     Существенным отличием препарата "Ветом" от препаратов ИНТЕРФЕРОНА (Реаферон, Интрон, Велферон, Бетаферон, Роферон, Лаферон, Ферон, Реальдерон, Берофор, Интрон-А) и индукторов интерферона (ридостин) является то, что синтез интерферона осуществляется бактериями, находящимися в желудочно-кишечном тракте. При этом иммуноактивное вещество попадает сразу в лимфоидную систему (Пейеровы бляшки кишечника), а не в кровоток. Подобный путь введение иммунорегулятора снижает иммунизацию против интерферона, имеющую место при парэнтеральном введении препаратов чистого интерферона и его индукторов. Кроме того, обеспечивается пролонгированная наработка интерферона на весь период существования бактерии в кишечнике. Результаты исследований показали, что иммунорегулирующая активность "Ветома" не ниже, а в некоторых случаях выше, чем у индукторов интерферона (Приложение 3).
     При лечении "Ветомом" заболеваний вирусной этиологии снижается риск осложнений бактериальной природы, так как препарат имеет антибактериальную активность, отсутствующую у препаратов чистого интерферона.
     "Ветом" не вызывает побочных явлений, характерных для ИНТЕРФЕРОНОВ (повышение температуры, головная и мышечная боль, тошнота, рвота, появление нейтрализующих интерфероновую активность антител, аллергические реакции). 
     "Ветом" значительно дешевле препаратов интерферона. Минимальная стоимость интерферона - около 10 долларов за дозу, "Ветома" - около 10 долларов за курс лечения. Для получения эффекта курс инъекций интерферона должен продолжаться не менее 3-х - 6 мес. Курс приема "Ветома - 5-10 дней.
     Применение per os делает "Ветом" более технологичным при профилактическом и терапевтическом использовании на больших группах животных. 

2.2.2 Мазевые препараты для местного лечения гнойных ран

     Препараты для лечения гнойных ран принято подразделять на простые и сложные. К сложным (многокомпонентным) составам можно отнести мазевые композиции, содержащие продукты жизнедеятельности бактерий. 
     По характеру действующих веществ мази для лечения гнойных ран делятся на следующие основные группы (Методич., 1989):
     · препараты отсасывающего действия (гипертонический р-р поваренной соли, гранулы Дебризана, Гелевина, активированных углей) 
     · препараты антимикробного действия на жировой основе (синтомициновая, тетрациклиновая и др.) 
     · препараты некролитического действия (протеолитические ферменты, салицилловая кислота и др.) 
     · препараты, стимулирующие эпителизацию раневой поверхности.
     В зависимости от стадии раневого процесса, формируется комплекс требований, предъявляемых к лекарственному средству. Поскольку заживление ран протекает по единому биологическому механизму и не зависит от генеза и локализации ран (Кузин М.И. с соавт. 1981), тактика применение препаратов строится в соответствии с патогенезом процесса (Даценко Б.М. с соавт.,. 1985):
     · в первой фазе воспалительного процесса требуется выраженное антибактериальное действие на возбудителей инфекции и высокая дегидратирующая способность для обеспечения оттока экссудата из раны; 
     · во второй фазе (регенерации) мазь должна оказывать протекторное действие на растущие грануляции и защищать их от вторичной инфекции, стимулировать обменные процессы в ране для её скорейшего заживления.
     Оптимальные лечебные композиции подбирают в зависимости от стадии раневого процесса и степени инфицированности раны.
     Для наружного применения используют гели, мази, линименты, губки, пленки, повязки, аэрозоли, искусственную кожу. Для изготовления мазей используют гидрофобную или гидрофильную основу. В этом качестве применяют гелеобразующие вещества и различные добавки: ПАВ, эмульгаторы, загустители, стабилизаторы эмульсионных свойств, одушки, консерванты, антиокислители, модификаторы и т.д. Однако, основная задача состоит в подборе наиболее эффективнных терапевтических агентов и их комбинаций. В этом качестве используют витамины, ферменты, гормоны, антибиотики, ростовые факторы и проч. 
     Из биологически активных веществ природного происхождения в противовоспалительных мазях широко используют прополис (Адамян А.А. с соавт., 1989г.), ферменты животного происхождения - трипсин, химотрипсин, папаин, гиалуронидазу и др. (Толстых П.И. и др.,1990г.), протеолитические ферменты микроорганизмов - апераза из грибов Aspergillus aryzae (Чернух А.М., 1979г.). фермент коллагеназу из гепатопанкреаса краба (Адамян А.А. и др. 1992). 
     Для получения мазевых форм, биологически активные вещества смешивают, как правило, с водорастворимой белковой основой, (желатин, агар-агар, коллаген, и др.), обеспечивающей всасывание; многоатомными спиртами (глицерин, гликоли, сорбит), загустителями (целлюлоза, сорбит и др.), жироподобными веществами (ланолин, диметилполисилоксан и др.) (Кузин М.И., и др. 1981). К этим и другим материалам предъявляются требования по обеспечению следующих физико-химических и биологических свойств: они должны предохранять рану от попадания бактерий, иметь дегитратирующие свойства, обладать биосовместимостью и адгезивностью (Степанюк Г.И. и др. 1992г.). Полезным свойством мазевой основы является также ее способность обеспечивать пролонгацию высвобождения лекарственных веществ (Колоб В.Г. и др. 1976).

1.2.3. Перспективы получения мазевых форм на основе биологически активных веществ, продуцируемых Bacillus Licheniformis и Bacillus Subtilis

     Изложенные выше требования, применяемые к мазям для лечения гнойных ран, с успехом могут быть применены и к комплексу биологически активных веществ, продуцируемых Bacillus Licheniformis и Bacillus Subtilis:
     1. Антимикробное действие эффективно оказывается спектром антибиотиков, продуцируемых в среду исследуемыми бактериальными штаммами. Важным элементом культуральной жидкости применяемого штамма Bacillus Subtilis является человеческий лейкоцитарный интерферон, ген встроен генно-инженерным путем. Наличие этого белка определяет значительный местный иммунорегулирующий эффект. 
     2. Некролитическое действие осуществляется протеолитическими ферментами различной субстратной специфичности, спектр которых синтезируется обеими бактериями. 
     3. Стимулирующие эпителизацию раневой поверхности вещества также продуцируются бактериальными культурами в период роста. Благотворное действие на процессы регенерации могут оказываться также интерфероном, который продуцируется использованным штаммом Bac. subtilis. Однако, этот эффект изучен недостаточно и нуждается в подтверждении при проведении доклинических и клинических испытаний (Арзамасцев Е.В., 1995г.)
     Отсасывающее действие может быть обеспечено основой, на которой будет изготавливаться мазевая форма. Представляется целесообразным использовать для этих целей агар-агар, который обладает значительной всасывающей способностью и нейтрален по отношению к биологически активным продуктам бактерий.
     Дополнительные полезные свойства лекарственной мазевой формы, достигаются путем введения соответствующих компонент. Так, обезболивающий эффект может достигаться за счет введения в состав мази тримекаина или родственных ему разрешенных к применению лекарственных средств. 
     В качестве стабилизирующей состав мази компоненты могут использоваться различные разрешенные к применению вещества: спирт, бензойная кислота и др. 
     Выбор добавок, обеспечивающих дополнительные свойства мази определяется совместимостью их с основными компонентами состава, что определяется путем физико-химических и биологических исследований.

1.3. Анализ патентной информации

     Известно несколько способов приготовления бактериальных лечебно-профилактических препаратов в жидкой форме:
     1. Способ, включающий раздельную наработку биомассы двух клонов бактерий Bac. subtilis и биомассы бактерий Bac. licheniformis c последующим объединением их в общую биомассу в виде микробной ассоциации. Указанную жидкую форму препарата используют для лечения гнойно-септических послеродовых заболеваний. (Авторское свидетельство СССР N 5о 01398868, МКИ А 61 К 35/74, опубл.1988 г.). Препарат имеет широкий спектр антагонистической активности. Недостатком данного способа приготовления препарата является то, что препарат в указанной жидкой форме долго не хранится и неудобен в применении.
     2. Способ получения бактериального препарата на основе Bacillus subtilis (заявка ЕПВ N 5о 00287699, MKИ C12 N 1/20, опубл. 26.10.88 года), включающий суспензионное культивирование штамма бактерий в питательной среде, содержащей источник углерода, источник азота, неорганические вещества, витамины, аминокислоты в течение от 0,5 до 7 дней. Выращенную бактериальную культуру отделяют от питательной среды, промывают и концентрируют. Полученный продукт высушивают и смешивают с добавками-наполнителями для получения фармацевтических или ветеринарных препаратов.
     Недостатком данного способа является сложность технологии получения препарата, т.к. включает операции по отмывке бактериальных клеток от компонентов питательной среды, а затем концентрирование бактерий центрифугированием. Препарат имеет малые сроки хранения, т.к. содержит живые бактерии в виде вегетативных палочек, которые не могут длительно сохранять свой биологически активные свойства.
     3. Способ получения бактериального препарата на основе Bacillus subtilis (заявка Японии N 5о 03-31171, МКИ А61К 35/74, опубл. 02.05.91 год), включающий культивирование штамма бактерий на зерне или продукте его измельчения с последующей сушкой и дополнительным измельчением полученного продукта. Препарат используют в качестве кормовой добавки для домашних животных и птиц.
     Недостатком данного способа является то, что препарат имеет малые сроки хранения, т.к. содержит живые бактерии (вегетативные клетки), которые не могут длительно сохранять свои биологически активные свойства.
     4. Существует способ получения препарата для защиты растений от болезней (Пат.РФ N 5о 02019966, MKИ A01 N 63/00, опубл.1994), включающий суспензионное культивирование бактерий Bac. subtilis до максимального накопления биомассы с последующим снижением концентрации основных компонентов питательной среды для перевода бактерий в споровую форму. Полученную культуральную жидкость со спорами бактерий подвергают распылительной или лиофильной сушке и смешивают с наполнителем. 
     Недостатком данного способа является узкий спектр антагонистической активности вследствие того, что препарат содержит только один штамм бактерий Bac. subtilis. Причем компонентный состав препарата не может быть использован в медицине и ветеринарии, т.к. содержит добавки, которые не пригодны в пищу человеку или животным. Кроме того технология получения препарата сложна и имеет большие энергозатраты, т.к. предусматривает сушку препарата методом распыления или лиофилизации. В процессе распылительной сушки значительно снижается титр биологической активности препарата.
     Таким образом, актуальна задача создания таких способов получения бактериальных препаратов, которые обеспечивали бы расширение спектра их биологической активности, а также упрощение технологии его получения .

С П И С О К       Л И Т Е Р А Т У Р Ы

     Адамян А.А., Глянцев С.П., Сахаров И.Ю., Савина Т.В. Морфологическая оценка воздействия коллагеназы камчатского краба Parditides camtschatica на раневой процесс в эксперименте // Бюлл. Эксперим. Биол. Мед.- 1992.- N12.- С.660-663.
     Адамян А.А., Добыш С.В., Сорокин А.В., и др. Использование полимерного дренирующие сорбента в лечении ран. - М.-1989.-57с.
     Айзенман Б.Е., Антибиотические свойства бактерий.- К.- Наук. Думка.- 1973.- 183с.
     Арзамасцев Е.В., Любимов Б.И. Современные требования к доклиническому изучению безопасности новых лекарственных препаратов // Эксперим. и клин. Фармакол. - 1995.- N.3ю- С.7-12.
     Белявская В.А. Рекомбинантные микробиотики // Сб. Научн. Трудов сотр. НИКТИ БАВ.- 1996.- С.190-197.
     Грачева Н.М., Гаврилов А.Ф., Соловьева А.И. и др. Эффективность нового бактерийного препарата биоспорина при лечении острых кишечных инфекций // Журн. Микробиол. 1996.- № 1.- С.75-77.
     Даценко Б.М., Белов С.Г., Тамм Т.Н. "Гнойная рана" - К., Здороье, 1985, 134 С.
     Дебабов В.Г., Лившиц В.А. Современные методы создания промышленных штаммов микроорганизмов. -М.- Высш.шк.- 1988.- 208с.
     Кузин М.И., Костюченок Б.М. "Раны и раневая инфекция"- М.- Мед.- 1981.- 678С.
     Колоб В.Г., Камышников В.С. Клиническая биохимия. Минск.- 1976.- 357с.
     Методические рекомендации по экспериментальному (доклиническому изучению лекарственных препаратов для местного лечения гнойных ран.- Ред.Даценко Б.М. и др.- 1989.- 46С.
     Никитенко В.И. Вместо лекарств - бактерии. // Наука в СССР - 1991.- N4.- С.116-121.
     Сборник рекомендаций "Ветом 1.1. - эффективное средство лечения и профилактики болезней органов пищеварения у телят" Ред. Ноздрин Г.А. -1996.- Кольцово). 
     Смирнов В.В., Резник С.Р. Теоретическое и экспериментальное обоснование использования нерезистентных видов бактерий для профилактики и лечения дисбактериозов.- в кн. V съезд Укр.микробиол. о-ва. Днепропетровск, февраль, 1980. Тез. Докл.: Киев : Наук. Думка, 1980.- с. 200-201.
     Смирнов В.В., Резник С.Р., Василевская И.А. Спорообразующие аэробные бактерии - продуценты биологически активных веществ.- Киев.- Наук.думка.- 1982г.
     Смирнов В.В., Резник С.Р., Сорокулова И.В. Высокоэффективный биологический препарат Биоспорин.// Врачебное дело - 1994.- №5-6.- С.133-137.
     Степанюк Г.И., Орностай В.В., Козлов В.Г. Сравнительная оценка ранозаживляющего действия бензофурокана, этадена и ксантинила никотината в эксперименте .// Пат. Физиол. Эксп. Тер. - N3.- С.16-18.
     Толстых П.И., Гостищев В.К., Арутюнян Б.Н. Протеолитические ферменты, иммобилизованные на волокнистых материалах, в хирургии.- Ереван.- 1990.- 64с.
     Топчий М.П. Применение препаратов из живых культур сенной палочки при дисбактериозах у телят: автореф. Дис. ... канд. Биол.Наук. - Минск.- 1979,- 21с.
     Чернух А.М., Воспаление. - 1979.- 447с.
     Balkwiil F.R. Interferons //The Lancet-1989.-N.8646.-P.1060.
     Carrier M.J., Chatfield S.N. et al. // J. Immunol.- 1992.- V.148.- P.1176-1181.
     Gresser I. How does interferon inhibit tumour growth?//Interferon-1985.-V.6.-P.93.
     Goldstein D., Laszlo J. Interferon therapy in cancer: from imaginon to interferon// Cancer Res.-1986.-V.46.-P.4315.
     Ingle M.B. Boyer E.W. Production of industrial enzymes by Bacilllus spectes.- Microbiology - 1976.- Waschington, 1976, p.420-426.
     Kimchi A. Autocrine interferon and the suppression of thec-myc nuclear oncogene//Interferon-1987.-V.8.-P.86.
     McMahon M., Kerr I.M. The biochemistry of the antiviral state. In Interferons: From Molecular Biology to Clinical Application. SGM Symposium 35 (Burke D.C. and Morris A.G. eds.), P.89-108., Cambridge University Press, Cambridge.
     Maceda-Coronel L., OrillazaV.E., Arguells A.L. Production of proteolytic enzyme from a local strain of Bacillus subtilis.- Philipp. J. Sci.- 1974.- V.103.- N.3.- 149-163.
     Revel M., Chebath J. Interferon-activated genes//Trends.Biochem.Sci.-1986.-april-P.166.
     Rocchietta J., The use of Bac. subtilis in the treatment of the diseases.- Minerva Med.- 1969.- 60.- N3/4.- p.117-123.
     Rudat K. Di Funktionseinheit Darm- und Immunsystem. Krankheit als Signal. // Volksheilkunde - 1994.- 46.- N5.- P.24-28, 31-33.
     Taylot-Paradimitiou J. The interferons//Biochem.Soc.Symp.-1984.- V.49.-P.109. 

     ПРИЛОЖЕНИЕ 1

     Таблица 1. Перечень выпускаемых препаратов a -интерферона

Таблица 2. Динамика цен на препараты интерферона (по каталогам фирм).

Таблица 3. Спектр вирусных инфекций человека, при которых получен положительный эффект от использования в терапии интерферона или его аналогов.

Таблица 4. Список онкологических заболеваний человека, при которых получен положительный эффект от применения препаратов интерферона или его аналогов.